Набор для обнаружения нуклеиновой кислоты нового коронавируса (SARS-Cov-2)
New CОроnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluрудаscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【PРодукt name 】Набор для обнаружения нуклеиновой кислоты нового коронавируса (SARS-Cov-2) (метод флуоресцентного зонда RT-PCR)
【Packaging specеслиcations 】25 тестов/набор
【Intended usвозраст】
Этот набор используется для качественного обнаружения нуклеиновой кислоты нового коронавируса в мазках из носоглотки, мазках из ротоглотки (горла), мазках из передней части носа, мазках из средней носовой раковины, смывах из носа и аспиратах из носа от лиц, у которых поставщик медицинских услуг подозревает наличие COVID19. Обнаружение генов ORF1ab и N нового коронавируса может быть использовано для вспомогательной диагностики и эпидемиологического мониторинга новой коронавирусной инфекции.
【Principles of the pрозаdure 】
Этот набор предназначен для конкретных зондов TaqMan и конкретных праймеров, разработанных для последовательностей генов ORF1ab и N нового коронавируса (SARS-Cov-2). Реакционный раствор ПЦР содержит 3 набора специфических праймеров и флуоресцентных зондов для специфического обнаружения мишеней, а дополнительный набор специфических праймеров и флуоресцентных зондов используется в качестве внутреннего стандартного контроля набора для обнаружения эндогенных генов домашнего хозяйства.
Принцип теста заключается в том, что конкретный флуоресцентный зонд переваривается и разлагается экзонуклеазной активностью фермента Taq в реакции ПЦР, так что репортерная флуоресцентная группа и погашенная флуоресцентная группа разделяются, так что система мониторинга флуоресценции может получать флуоресцентный сигнал. сигнал, а затем за счет эффекта обогащения ПЦР-амплификации сигнал флуоресценции зонда достигает установленного порогового значения - значения Ct (порог цикла). В случае отсутствия целевого ампликона репортерная группа зонда близка к группе тушения. В это время происходит резонансный перенос энергии флуоресценции, и флуоресценция репортерной группы гасится группой тушения, так что флуоресцентный сигнал не может быть обнаружен прибором флуоресцентной ПЦР.
Для контроля использования реагентов во время теста набор оснащен положительным и отрицательным контролем: положительный контроль содержит рекомбинантную плазмиду целевого сайта, а отрицательный контроль - дистиллированную воду, которую используют для контроля загрязнения окружающей среды. При тестировании рекомендуется одновременно устанавливать положительный и отрицательный контроль.
【Main comпоненts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Компонэнты | |
| Намe | Спецификацияификация | Квантитность | Квантитность | |
| Положительный контроль | 180 мкл/флакон | 1 | 1 | Искусственно сконструированные плазмиды, Дистиллированная вода. |
| Отрицательный контроль | 180 мкл/флакон | 1 | 1 | Дистиллированная вода |
| Смесь SARS-Cov-2 | 358,5 мкл/флакон | 1 | / | Конкретные пары праймеров, флуоресцентные зонды для специфического обнаружения, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, дистиллированная вода и т. д. |
| Ферментная смесь | 16,5 мкл/флакон | 1 | / | Ферменты Taq, обратная транскриптаза, ферменты UNG и т. д. |
| Смесь SARS-Cov-2 (лиофилизированная) | 25 тестов/флакон | / | 1 | Специфические пары праймеров, специфические флуоресцентные зонды для обнаружения, dNTP, ферменты Taq, обратная транскриптаза, дистиллированная вода и т. д. |
| 2x буфер | 375 мкл/флакон | / | 1 | MgCl2, KCl, трис-Hcl, дистиллированная вода и т. д. |
Примечание:(1) Компоненты разных партийных комплектов нельзя смешивать или заменять местами.
(2) Приготовьте собственный реагент: набор для экстракции нуклеиновых кислот.
【Storage condитиons и expiration date 】
For BST-SARS-25:Транспортируйте и храните при температуре -20±5℃ в течение длительного времени.
For BST-SARS-DR-25:Транспортировать при комнатной температуре. Хранить при температуре -20±5℃ в течение длительного времени.
Избегайте повторяющихся циклов замораживания-оттаивания. Срок действия предварительно установлен на 12 месяцев.
На этикетке указана дата изготовления и использования.
После первого вскрытия реагент можно хранить при температуре -20±5°С не более 1 месяца или до окончания срока годности реагента, в зависимости от того, какая дата наступит раньше, во избежание повторных циклов замораживания-оттаивания, а также количества замораживаний реагента. -циклы оттаивания не должны превышать 6 раз.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Применимый тип образца: раствор экстрагированной нуклеиновой кислоты.
2. Хранение и транспортировка образцов: Хранить при температуре -20±5℃ в течение 6 месяцев. Замораживать и размораживать образцы не более 6 раз.
【Tстандартное восточное времяing metход】
1.Nucleic acid extraction
Выберите подходящий набор для экстракции нуклеиновой кислоты для извлечения вирусной нуклеиновой кислоты и следуйте инструкциям соответствующего набора. Рекомендуется использовать набор для экстракции и очистки нуклеиновых кислот производства Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. или эквивалентный набор для очистки нуклеиновых кислот.
2. Rкаждыйtion переживатьnt prepараtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Удалите смесь SARS-Cov-2 и смесь ферментов, полностью расплавьте смесь при комнатной температуре с помощью устройства Vortex, а затем ненадолго центрифугируйте.
(2) 16,5 мкл смеси ферментов добавляли к 358,5 мкл смеси SARS-Cov-2 и тщательно перемешивали, получая смешанный реакционный раствор.
(3) Подготовьте чистую октальную пробирку для ПЦР емкостью 0,2 мл и пометьте ее 15 мкл вышеуказанного смешанного реакционного раствора на лунку.
(4) Добавьте 15 мкл раствора очищенной нуклеиновой кислоты, положительный контроль и отрицательный контроль и тщательно закройте крышку октальной пробирки.
(5) Хорошо перемешайте, перевернув пробирку, и быстро центрифугируйте, чтобы сконцентрировать жидкость на дне пробирки.
1
2.2 For BST-САРS-DR-25:
(1) Добавьте 375 мкл 2x буфера в смесь SARS-Cov-2 ((лиофилизированную) для приготовления реакционной смеси. Тщательно перемешайте пипеткой, а затем ненадолго центрифугируйте. （После приготовления реакционной смеси рекомендуется хранить ее при -20 ℃ при температуре длительное хранение.)
(2) Подготовьте чистую октальную пробирку для ПЦР емкостью 0,2 мл и пометьте ее 15 мкл реакционной смеси на лунку.
(3) Добавьте 15 мкл раствора очищенной нуклеиновой кислоты, положительный контроль и отрицательный контроль и тщательно закройте восьмеричную крышку пробирки.
(4) Хорошо перемешайте, перевернув пробирку вверх дном, и быстро центрифугируйте, чтобы сконцентрировать жидкость на дне пробирки.
3. ПЦР ampЛифиcation （Пожалуйста, обратитесь к руководству по эксплуатации прибора для рабочих настроек.）
3. 1. Поместите 8-пробирку для ПЦР в камеру для образцов флуоресцентного прибора для ПЦР и установите тестируемый образец, положительный контроль и отрицательный контроль в соответствии с порядком загрузки.
3.2 Канал обнаружения флуоресценции:
(1) Ген ORF1ab выбирает канал обнаружения FAM (Репортер: FAM, Гаситель: Нет).
(2) Ген N выбирает канал обнаружения VIC (Репортер: VIC, Гаситель: Нет).
(3) Ген внутреннего стандарта выбирает канал обнаружения CY5 (Репортер: CY5, Гаситель: Нет).
(4) Пассивное задание установлено на ROX.
3.3 Настройка параметров программы ПЦР:
| Шаг | Температура (℃) | Время | Количество циклов | |
| 1 | Реакция обратной транскрипции | 50 | 15 минут | 1 |
| 2 | Активация фермента Taq | 95 | 2,5 мин. | 1 |
| 3 | Активация фермента Taq | 93 | 10 с | 43 |
| Расширение отжига и приобретение флуоресценции | 55 | 30 с | ||
После настройки сохраните файл и запустите программу реакции.
4.Results analysis
После завершения программы результаты автоматически сохраняются и анализируется кривая амплификации. Кривая усиления установлена на пороговое значение прибора по умолчанию.
【Explanation of test resuлтс 】
1. Определите достоверность эксперимента: канал положительного контроля FAM, VIC должен иметь типичную кривую амплификации, а значение Ct обычно меньше 34, но может колебаться из-за разных пороговых настроек разных инструментов. Отрицательный контрольный канал FAM, VIC должен представлять собой неамплифицированный Ct. Согласовано, что вышеуказанные требования должны быть соблюдены одновременно, в противном случае данное испытание будет недействительным.
2. Решение по результатам
| Канал FAM/VIC | Результат решения |
| Кт<37 | Образец теста положительный |
| 37≤Ct<40 | Кривая амплификации имеет S-образную форму, и подозрительные образцы необходимо исследовать повторно; если результаты повторного обследования совпадают, его оценивают как положительный, в противном случае — отрицательный. |
| Ct≥40 или отсутствие усиления | Тест образца отрицательный (или ниже нижнего предела обнаружения набора) |
Примечание: (1) Если и канал FAM, и канал VIC одновременно положительны, SARS-Cov-2 считается положительным.
(2) Если канал FAM или канал VIC положительный, а другой канал отрицательный, тест следует повторить. Если он одновременно окажется положительным, он будет расценен как положительный на SARS-Cov-2, в противном случае он будет расценен как отрицательный на SARS-Cov-2.
Сопутствующие товары
-
Набор для обнаружения антител IgM/IgG к COVID-19
Набор для обнаружения антител IgM/IgG к COVID-19 (метод иммунохроматографии с коллоидным золотом) Руководство по эксплуатации 【НАИМЕНОВАНИЕ ПРОДУКТА】Набор для обнаружения антител IgM/IgG к COVID-19 (метод иммунохроматографии с коллоидным золотом) 【ХАРАКТЕРИСТИКИ УПАКОВКИ】 1 тест/набор, 10 тестов/набор 【 АННОТАЦИЯ】 Новые коронавирусы относятся к роду β. COVID-19 – острое респираторное инфекционное заболевание. Люди, как правило, восприимчивы. В настоящее время основным источником...
-
Набор для экстракции или очистки нуклеиновой кислоты
Набор для экстракции или очистки нуклеиновой кислоты или хранить при -20 ℃. Образец следует транспортировать, скручивая его при температуре 0 ℃. Введение Набор для экстракции или очистки нуклеиновых кислот (метод магнитных шариков) предназначен для автоматической очистки РНК и ДНК из жидкостей организма (таких как мазки, плазма, сыворотка) с использованием инструментов автоматического выделения нуклеиновых кислот. Технология магнитных частиц позволяет получить высококачественную ДНК/РНК, подходящую для...
-
Набор для анализа антигена SARS-CoV-2 (иммунохроматограф...
Набор для анализа антигена SARS-CoV-2 (метод иммунохроматографии) Руководство по эксплуатации 【НАИМЕНОВАНИЕ ПРОДУКТА】Набор для анализа антигена SARS-CoV-2 (метод иммунохроматографии) 【ХАРАКТЕРИСТИКИ УПАКОВКИ】 1 Тест/набор 【АННОТАЦИЯ】 Новые коронавирусы относятся к роду β. COVID-19 – острое респираторное инфекционное заболевание. Люди, как правило, восприимчивы. В настоящее время основными пациентами, инфицированными новым коронавирусом, являются...
-
Набор для анализа антигена SARS-CoV-2
Набор для анализа антигена SARS-CoV-2 (метод иммунохроматографии) Руководство по эксплуатации 【НАЗВАНИЕ ПРОДУКТА】Набор для анализа антигена SARS-CoV-2 (метод иммунохроматографии) 【ХАРАКТЕРИСТИКИ УПАКОВКИ】 1 тест/набор, 25 тестов/набор, 100 тестов/набор 【АННОТАЦИЯ】 Новые коронавирусы относятся к роду β. COVID-19 – острое респираторное инфекционное заболевание. Люди, как правило, восприимчивы. В настоящее время основным источником заражения являются пациенты, инфицированные новым коронавирусом; бессимптомно инфицированные люди...